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启动子是合成生物学、代谢工程中控制和调控基因表达的重要工具，其作用强度会影响基因表达产物的产量和细胞代谢水平。为寻找合适的启动子，研究人员获得了POL1～POL5、CBF₁共6种启动子，将其分别与荧光蛋白基因EGFP构建成重组型启动子并导入毕赤酵母细胞，以研究启动子的作用强度。含CBF1-EGFP重组型启动子质粒的结构如图所示，用于扩增CBF1和EGFP的引物的碱基序列如表1所示。回答下列问题：

表1

引物名称	序列（5'→3'）
CBF1引物1	CCGGAATTCCGTTAGGACTTCTT
CBF1引物2	TCCTCGCCCTTGCTCACCATT
EGFP引物1	ATGGTGAGCAAGGGCGAGGA
EGFP引物2	ACGCGTCGACTTACTTGTACAG

注：引物序列之外、CBF1和EGFP无表中相关限制酶识别和切割序列。
(1)在PCR扩增启动子CBF1时，CBF1引物1与模板链结合后，在___酶的作用下将脱氧核苷酸连接到引物的___（填“3'”或“5'”）端，以延伸子链。
(2)限制酶及识别序列如表2所示。构建CBF1-EGFP重组型启动子质粒时，要选择___限制酶分别对图中a、b两处进行切割，EGFP的下游需要添加___序列，使转录终止。
表2

限制酶	BamHI	EcoRI	SalI	SmaI
识别和切割序列	G↓GATCC	G↓AATTC	G↓TCGAC	GGG↓CCC

(3)检测含CBF1-EGFP重组型启动子质粒是否构建成功时，将重组质粒导入酵母菌。培养后将酵母菌涂布到含有___的培养基上，挑选单菌落并提取DNA，经酶切后利用表1中所示的___两种引物进行PCR扩增和鉴定。
(4)EGFP基因能表达荧光蛋白，蛋白质含量与荧光强度呈正相关。为比较POL1～POL5、CBF1这6种启动子的作用强度，应分别检测___。若POL3的作用强度最强，则预期结果是___。

动物细胞培养在实践中有很大的用途——在检验药物毒性和开发药物方面有重要的应用。为研究药物的抗肝癌效果，需要大量肝癌细胞作为实验材料。回答下列问题：
(1)肝癌细胞的培养液中通常需要加入___等一些天然成分。培养过程中需要定期更换培养液，目的是___。癌细胞其中一个特点是能够无限增殖，据此推测培养肝癌细胞时，___（填“会”或“不会”）发生接触抑制现象。
(2)为了初步检测药物X和Y的抗癌效果，在细胞培养板的每个孔中加入相同数量的肝癌细胞，使其贴壁生长，实验组加入等体积相同浓度的溶于二甲基亚矾（溶剂）的药物X或Y，培养过程及结果如图表所示。对照组应加入的是___。根据实验结果判断，药物X、药物Y均有抗癌作用，抗癌效果更好的是___，判断依据是___。

(3)为降低药物X治疗肝癌的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物（ADC），制备单克隆抗体的过程中，可用灭活病毒诱导法诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与___发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的___分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。ADC进入肝癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物作用于肝癌细胞，可导致___（填“细胞凋亡”或“细胞坏死”）。与直接使用抗肿瘤药物相比，ADC对人体的副作用更小，原因是___。

植物遭受低温胁迫会产生活性氧（ROS），ROS对蛋白质、膜脂和色素分子都有破坏作用，在光能过剩的条件下容易使光反应速率和光合速率降低，出现光抑制现象，而过氧化物歧化酶（SOD）能清除ROS。为研究植物生长调节剂甲对水稻幼苗光抑制的影响，实验小组开展了四组实验，处理方法为第①组：低温+清水，第②组：低温+甲溶液，第③组：常温+甲溶液，第④组为对照组。定期检测水稻幼苗的净光合速率和SOD活性的变化情况，结果如图所示。回答下列问题：

(1)实验过程中，需要给予水稻幼苗___（填“低”“适宜”或“高”）光照。第④组的处理方法为___。
(2)低温胁迫诱发光抑制的植物的CO₂固定速率降低，原因可能是___；___。
(3)结合实验结果分析，植物生长调节剂甲可___水稻幼苗的光抑制，其影响光抑制的机理是___。

大引物PCR定点突变常用于研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变需要通过PCR获得，其过程如图所示。下列有关分析错误的是（       ）

   

A．向PCR体系中加入Mg²⁺能激活DNA聚合酶

B．PCR-I经过一次循环即可获得大引物模板

C．PCR-I得到的产物均作为PCR-Ⅱ的引物

D．PCR-Ⅱ选用大引物和引物乙以获得定点诱变的基因片段

基因递送是植物遗传改良的重要技术之一，我国多个实验室合作开发了一种新型基因递送系统——切—浸一生芽，简称CDB法。利用常规转化法和CDB法在某植物中递送基因的过程如图1和图2所示。下列相关分析正确的是（       ）

A．过程①属于脱分化，形成的愈伤组织细胞具有全能性

B．共培养时，目的基因能整合到愈伤组织细胞染色体的DNA上

C．采用CDB法进行基因递送的过程需要借助植物组织培养技术进行操作

D．可依据目的基因控制的性状或标记基因控制的性状筛选出阳性毛状根

某实验小组在探究酵母菌细胞呼吸方式的实验中，连通橡皮球（或气泵）让少量空气间歇性地依次通过装置中的3个锥形瓶，如图所示。下列相关叙述正确的是（       ）

A．向a瓶中加入NaOH溶液的目的是避免外界空气中CO2的干扰

B．适当增加橡皮球（或气泵）的通气量，会增加石灰水的浑浊程度

C．实验过程中向a瓶通入的空气越多，则b瓶产生的酒精越多

D．若c瓶加入的是溴麝香草酚蓝溶液，则溶液最终会变成黄色

免疫球蛋白G（IgG）是细胞外液中重要的抗体，IgG的两条H链和两条L链通过四对二硫键相连接。H链和L链氨基端氨基酸的序列变化较大，此区域称为可变区，羧基端氨基酸的序列相对稳定，此区域称为恒定区。下列分析正确的是（       ）

A．浆细胞中的内质网和高尔基体协作完成IgG的加工和分泌

B．可用³H标记合成IgG的氨基酸来追踪IgG在机体内的分布

C．酒精和高温会破坏IgG的二硫键和肽键，从而导致其变性失活

D．不同抗原刺激机体产生多种IgG，不同IgG可变区氨基酸的序列不同

某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞，然后将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠，实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　）

A．体外培养卵母细胞时，需将培养皿置于只含CO2的培养箱中进行培养

B．修饰后的次级卵母细胞中H19和Gtl2基因的转录受影响

C．移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来

D．推测孤雌小鼠体细胞中染色体数目是卵母细胞中染色体数目的一半

近年来，野生动物郊狼的物种数量不断减少。科研人员利用种间体细胞核移植技术培育小郊狼的流程如图所示。下列叙述正确的是（       ）

A．小郊狼的遗传性状和代孕家犬的相同

B．使用显微操作技术对卵母细胞去核，且所用卵母细胞处于MⅠ期

C．②是透明带，①中的染色体数目与初级卵母细胞中的相同

D．可用乙醇等处理激活结构③，使其完成细胞分裂和发育进程

T4溶菌酶在温度较高时易失去活性。科学家对编码T4溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T4溶菌酶中第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸从而增加二硫键的数量，提高了T4溶菌酶的耐热性。下列相关叙述正确的是（       ）

A．为获得耐高温的T4溶菌酶需先设计其空间结构，选择合适位点更换氨基酸

B．通过此项研究改造后获得的性状不能遗传给后代

C．此项研究中可利用基因的定点诱变技术对指导T4溶菌酶蛋白合成的mRNA进行碱基替换

D．T4溶菌酶的改造属于蛋白质工程，自然界中的酶都可通过蛋白质工程进行改造