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启动子是合成生物学、代谢工程中控制和调控基因表达的重要工具，其作用强度会影响基因表达产物的产量和细胞代谢水平。为寻找合适的启动子，研究人员获得了POL1～POL5、CBF₁共6种启动子，将其分别与荧光蛋白基因EGFP构建成重组型启动子并导入毕赤酵母细胞，以研究启动子的作用强度。含CBF1-EGFP重组型启动子质粒的结构如图所示，用于扩增CBF1和EGFP的引物的碱基序列如表1所示。回答下列问题：

表1

引物名称	序列（5'→3'）
CBF1引物1	CCGGAATTCCGTTAGGACTTCTT
CBF1引物2	TCCTCGCCCTTGCTCACCATT
EGFP引物1	ATGGTGAGCAAGGGCGAGGA
EGFP引物2	ACGCGTCGACTTACTTGTACAG

注：引物序列之外、CBF1和EGFP无表中相关限制酶识别和切割序列。
(1)在PCR扩增启动子CBF1时，CBF1引物1与模板链结合后，在___酶的作用下将脱氧核苷酸连接到引物的___（填“3'”或“5'”）端，以延伸子链。
(2)限制酶及识别序列如表2所示。构建CBF1-EGFP重组型启动子质粒时，要选择___限制酶分别对图中a、b两处进行切割，EGFP的下游需要添加___序列，使转录终止。
表2

限制酶	BamHI	EcoRI	SalI	SmaI
识别和切割序列	G↓GATCC	G↓AATTC	G↓TCGAC	GGG↓CCC

(3)检测含CBF1-EGFP重组型启动子质粒是否构建成功时，将重组质粒导入酵母菌。培养后将酵母菌涂布到含有___的培养基上，挑选单菌落并提取DNA，经酶切后利用表1中所示的___两种引物进行PCR扩增和鉴定。
(4)EGFP基因能表达荧光蛋白，蛋白质含量与荧光强度呈正相关。为比较POL1～POL5、CBF1这6种启动子的作用强度，应分别检测___。若POL3的作用强度最强，则预期结果是___。