下面是某研究小组开展的“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”研究,请协助完成有关问题:
材料仪器:新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等。
化学试剂:pH为7.4的缓冲液、柠檬酸钠、奈氏试剂(与NH
4+反应出现黄色或红棕色沉淀)、饱和(NH
4)
2SO
4溶液、生理盐水等。
实验步骤:
样品获取:向新鲜猪血中加入适量的柠檬酸钠,静置一段时间后取上层血浆。
(1)盐析法粗提蛋白质:
①向血浆中加入一定体积的饱和(NH
4)
2SO
4溶液,使(NH
4)
2SO
4的浓度达到50%,充分混合后静置、离心,取沉淀物。
②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解,再向其中加入一定体积的饱和(NH
4)
2SO
4溶液,使(NH
4)
2SO
4的浓度达到33%,充分混合后静置、离心,取沉淀物。
③重复步骤①、②2~3次,最后用生理盐水将沉淀溶解即得粗提品。盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是
___,重复步骤①、②的主要目的是
___。
(2)透析除盐:将粗提品装入透析袋,以pH为7.4的缓冲液作透析液,每隔4h更换一次透析液,每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH
4+的量。用透析法除盐的原理是
___,透析除盐利用缓冲液作透析液的目的是
___。检测中,若观察到透析液
___时,即可终止透析。
(3)凝胶色谱法分离:用此方法分离时,蛋白质的
___,其运动的路径越长。将透析后的样品经凝胶柱洗脱,获得纯净血浆某白蛋白样品。
(4)分子量测定:电泳中各种分子的迁移速度取决于
___(至少答两点),欲用电泳法测定所分离的蛋白质的分子量。通常在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入
___。下图中表示某同学得出的电泳结果,其结果是否能表示分离得到三种白蛋白?
___(“是”或“否”),原因是
___。分离得到的三种分子大小关系是
___。