为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对甘蓝型油菜油脂的积累机制,科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因(Luc)构建成基因表达载体甲,基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙,相关序列及酶切位点如图所示。
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(1)利用PCR扩增LEA基因时,需要在反应体系中添加的有机物质有引物、模板、
___________还需要在引物的
___________(填“3´端”或“5´端”)添加限制酶识别序列,添加序列对应的限制酶是
___________,选择上述酶的依据是
___________。
(2)为了构建基因表达载体甲,依据图中已知碱基序列,在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为
_________,扩增
_____________代后会得到等长的8条DNA片段。
(3)农杆菌转化甘蓝型油菜细胞时,T-DNA的作用是
___________,该过程发生的变异类型为
___________(4)乙酰-CoA羧化酶基因(AC)是油脂合成过程的关键酶基因,甘油三酯酯酶基因(ATGL)是油脂分解过程的关键酶基因。将基因表达载体甲、乙分别导入植物细胞培养成转基因植物A、B,在干旱胁迫的环境下培养两种转基因植物和正常植物,分别检测植物体内AC和ATGL基因的表达水平,结果如下图。
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①在分子水平上,用
____________方法检测AC酶和ATGL酶的含量可得到上述结果。
②基于以上研究,干旱胁迫基因LEA和VOC在甘蓝型油菜油脂积累中的机制是
___________。