学进去

海稻86是一种重要的耐盐碱水稻种质资源，为研究海稻两个NAC转录因子OsHDNAC1和OsHDNAC2是否在其应答盐胁迫的过程中发挥功能，科研人员开展相关的实验研究。
Ⅰ、材料处理：将海稻86的种子平整、均匀散布于湿润滤纸上，28℃培养2~3d，待长出根后转移至含有营养液的植物水培盒中，置于培养箱中继续生长7d，随后用较高浓度的NaCI溶液进行盐胁迫处理，并分别于0、6、15、24、60和72h取植株地上部分，经液氮速冻后保存至超低温冰箱待用。
Ⅱ、RNA提取及cDNA合成：取冷冻于-80C的叶片经液氮研磨成粉末状，加入特定试剂提取总RNA，将提取得到的RNA进行琼脂糖凝胶电泳，观察RNA的质量和完整性，并利用仪器测定RNA浓度，随后将RNA反转录为cDNA，得到的产物保存至-20℃冰箱。
Ⅲ、基因克隆及克隆载体构建：设计引物PCR扩增，在凝胶成像系统中对扩增产物进行观察检测，并对目的条带进行纯化回收。将回收得到的DNA产物连接到含有真核启动子和荧光蛋白基因的亚细胞定位载体pNC-Green-SubN上，将连接产物转化至大肠杆菌感受态细胞TOP10中，涂布至平板后于37C下培养过夜，通过菌液PCR鉴定阳性克隆，测序验证正确后，提取质粒保存至-20℃冰箱。
Ⅳ、亚细胞定位：将测序正确的质粒转化至农杆菌感受态细胞中，将农杆菌菌液注射至烟草表皮细胞，随后将烟草置于26℃、14h光照/10h黑暗的条件下培养48h，利用激光扫描共聚焦显微镜观察荧光在烟草细胞中的分布情况。
Ⅴ、表达量分析：为了解析OsHDNAC1、OsHDNAC2在海稻应答盐胁迫过程中的功能，利用荧光定量PCR分析OsHDNAC1和OsHDNAC2在盐胁迫下不同时间点的表达水平。
回答下列问题：
(1)获取RNA的过程需要选择植株的地上部分，而不是直接将种子冷冻破碎的原因是______。
(2)将RNA反转录为cDNA，反应体系中应添加原料______和______酶。
(3)在对总cDNA进行PCR扩增，通过____中检索出目的基因的序列，分别设计引物OsHDNAC1-F/R和 OsHDNAC2-F/R 进行 PCR扩增。在反应体系（模板 cDNA1．0μL，正向引物和反向引物各1．0μL，2×Taq Master Mix 12．5μL，ddH2O9．5μL，足量dNTP等）中扩增。通常在PCR扩增的最后一轮，延伸10min，推测其目的是_____。用该体系进行PCR的目的是______。在过程Ⅲ中对大肠杆菌菌液PCR鉴定阳性克隆，而不选择直接观察荧光产生的原因是_______。培养大肠杆菌感受态细胞TOP10的目的是________。
(4)亚细胞定位分析显示OsHDNAC1和OsHDNAC2均定位在____（细胞质/细胞核/细胞质和细胞核），表明OsHDNAC1和OsHDNAC2基因编码的蛋白符合转录因子发挥调控功能的特点。
(5)下图为利用荧光定量PCR分析OsHDNAC1和OsHDNAC2在盐胁迫下不同时间点的表达水平，上述结果表明__________。