学进去

培育抗草甘膦转基因大豆时，首先需要构建UTR—CTP—EPSPS序列（UTR—前导序列；CTP—叶绿体定位信号肽序列；EPSPS—抗草甘膦基因）和pCAMBIA1300质粒的重组载体，构建过程如图所示。重组载体通过电转化方式导入大肠杆菌DH5R中，经测序验证后导入农杆菌菌株EHA105中形成转化的工程菌株，再转染大豆。回答下列问题：

(1)构建UTR—CTP—EPSPS序列与pCAMBIA1300质粒的重组载体过程中，进行PCR时需要在两种引物的_________端连接限制酶_________的识别序列，引物序列的确定应依据_________，PCR依据的原理是__________。
(2)重组质粒PTWGM1接入的UTR—CTP—EPSPS序列中，EPSPS基因与CTP绑定的目的是_________。利用质粒PTWGM1可以大量扩增UTR—CTP—EPSPS片段，是因为其结构中含有_________。
(3)质粒PTWGM1通过电转化方式导入大肠杆菌DH5R的关键是利用电脉冲在_________处打开通道，使得外源DNA能够顺利进入细胞内。要确定细胞电转化是否成功，需要在培养大肠杆菌的培养基中添加__________进行筛选。
(4)若要回收EPSPS片段，可将扩增产物通过电泳进行分离后，割下凝胶以回收扩增的EPSPS基因。在凝胶中DNA分子的迁移速率与_________（答出两点）有关。若除目标条带外，还出现了少量的小片段非特异性扩增带，原因可能是_________（答出一点）。