学进去

为研究山羊乳蛋白基因编辑，实现羊乳“人源化”改造，研究人员利用CRISPR/Cas9系统敲除了山羊乳腺细胞中致敏原β－乳球蛋白（BLG）基因，同时在相应位点导入人乳铁蛋白（hLF）基因，其原理如图所示。该研究为培育羊乳中低致敏原和富含人乳铁蛋白功能营养成分的转基因山羊新品种提供了科学依据。

(1)利用CRISPR/Cas9系统敲除山羊乳腺细胞中致敏原β－乳球蛋白（BLG）基因时，科研人员设计了sgRNA引导序列，sgRNA能够通过__________与山羊基因组中BLG基因座的第一外显子（Ex1）中的靶位点结合。该sgRNA引导序列的3′端的前6个碱基为___________________。
(2)科研人员构建了BLC14乳腺特异性表达载体，并将其作为打靶载体，含山羊BLG3′端序列和BLG5′端序列、CMV（一种启动效率较高的强启动子）、hLFcDNA、NEO基因（抗性基因）等，其中CMV的作用是_________________________。
(3)将打靶载体BLC14与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞，要检测人乳铁蛋白（hLF）基因是否整合到山羊基因组中，通常要提取DNA，然后进行PCR检测。提取DNA过程中需加入EDTA，EDTA的作用是_____________，防止核DNA被酶解。对PCR扩增产物对PCR产物进行电泳，结果出现多条条带，最可能的原因是__________。