学进去

科研人员将酵母液泡Cd转运蛋白基因（YCF1，1200bp）与质粒P0构建基因表达载体P1用于基因工程实验，过程如下图1所示，其中部分限制酶的识别序列与切割位点如下：
EcoR V:GAT↓ATC，SauAI：↓GATC，BamHI：G↓GATCC。请回答下列问题。

(1)为获取YCF1基因，将酵母细胞的全部DNA提取后通过①过程用EcoR V酶切割______ 键，得到含_____末端的YCF1基因。
(2)②过程利用PCR技术扩增目的基因时，需要根据目的基因______设计出一对引物，此外还需要在引物的两端加上限制酶识别序列，酶切后形成的黏性末端碱基序列为5'________。
(3)用_____酶切质粒P0后与②过程产物在_______酶的作用下，形成基因表达载体P1。图中质粒P0除标注元件外，还缺少_____结构。
(4)为了筛选出含P1的受体菌，首先需要在添加_______的平板培养基上进行培养，之后利用影印平板法在含_____的平板培养基上继续培养，观察对比即可得到含P1受体菌。
(5)科研过程中还可以采用PCR技术检测受体菌是否成功转入了P1。提取转染后的四个受体菌S1-S4的总DNA，用目的基因的引物扩增后进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图2所示：
①图2中M泳道为标准对照组（Marker），其实质为_______。
②图2中样本_______为成功转入了P1的受体菌，S4样本出现的结果可能原因有_______（在下列选项中选择）。
A.模板受到污染 B.引物特异性不强 C.退火温度偏低D.退火温度偏高