学进去

DNA测序技术是一项基础性的生命科学技术，它的出现和发展推动了生命科学的快速发展。科学家桑格—库森法以DNA合成反应为基础，利用双脱氧法测序，需要用到³²P标记的双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）与脱氧核苷三磷酸（dNTP）。ddNTP与dNTP的结构如图所示，当ddNTP按碱基互补配对的方式加到正在复制的DNA子链中后，因其3’端无—OH不能连接下一个核苷酸而使DNA子链的延伸立即终止，于是得到长短不一、以某种碱基为末端且被³²P标记的DNA子链片段，电泳分离这些子链片段并进行放射自显影，得到图谱后就可以读取核苷酸的排列顺序。回答下列问题：

(1)PCR反应的基本步骤包括___________、延伸，其中需要的酶是___________。除上述应用外，PCR技术在基因工程中的应用还有___________（答出1点）。
(2)要利用双脱氧法测定单链DNA片段“5'—GCCTAAGATCGCA—3'”的核苷酸的排列顺序，需设置四个反应体系。
①除单链模板、酶、dNTP外，每个反应体系还都需要加入___________种引物、含Mg²⁺的___________等；四个反应体系的差别在于加入的_____________不同；dNTP是DNA复制时的原料，在与模板链结合时，需水解___________个磷酸基团。
②要得到以碱基G为末端且被³²P标记的DNA子链片段，反应体系中需加入的特有原料是____________（填“α”、“β”或“γ”）位被³²P标记的ddGTP，所得到的被³²P标记的DNA子链片段长度有___________种。