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从人的胰岛细胞中制备胰岛素编码基因，将其与合适的质粒用产自大肠杆菌的DNA连接酶拼接成重组分子，后者导入酵母细胞便可实现基因重组人胰岛素的工业化生产，用于糖尿病的治疗。
(1)通过上述基因工程技术获取目标产物，涉及如下步骤，则合理的操作步骤排序是____________________。
①筛选和鉴定含目的基因的受体细胞②选用合适的方法获取目的基因③借助发酵工程规模化生产目标蛋白④目的基因导入受体细胞⑤目的基因和运载体重组构建表达载体
(2)在常规PCR的每一轮扩增反应中，温度随时间的变化顺序是__________。

(3)图1表示DNA片段上的目的基因，在对目的基因进行扩增时,可以从A,B,C,D单链 DNA 片段中选取哪些片段作为引物___________。


(4)若人胰岛素编码基因(长度为1.2kb)两端是用限制性内切核酸酶Pst1(识别序列和切割位点如图3所示)切开的，那么图2所示的质粒应使用限制性内切核酸酶___________切开，才能保证人胰岛素编码基因与质粒直接粘连拼接。构建好的重组质粒长度为___________kb。
(5)已转到重组质粒上的单个人胰岛素编码基因__________ (选填“能”或“不能”)再用上述两种限制性内切核酸酶切开，理由是________________________________________
(6)上述基因工程的理论依据是不同生物                

A．细胞结构完全相同	B．DNA 双螺旋结构相同
C．都遵循中心法则	D．共有一套遗传密码子

(7)人胰岛素样生长因子的结构和性质与人胰岛素高度相似，人胰岛素样生长因子在与人胰岛素B链对应的第28位和第29位氨基酸分别是赖氨酸和脯氨酸,而人胰岛素在这两处的氨基酸序列正好颠倒，推测这是人胰岛素形成多分子形式的关键原因，为了证实这一猜想，需要更换人胰岛素这两个位点的氨基酸顺序。下列有助于证实这一猜想的操作是                

A．定点突变

B．定向进化

C．物理诱变

D．重新设计

(8)与大肠杆菌相比，从结构和功能的角度分析利用酵母菌生产胰岛素的优势有________________ 。